Главная страницаДля девушек

10/02/12

Реакция связывания комплемента.



Реакция связывания комплемента. При определении аутоантител у юных спортсменов мы обычно используем реакцию длительного связывания комплемента на холоде, по В. И. Иоффе (1943).
Необходимые ингредиенты: гемолитическая сыворотка, 3% бараньи эритроциты, комплемент.

Ход реакции.

1. Испытуемые сыворотки разводят физиологическим раствором (лучше веронал мединаловый буфер) в отношении 1: 10, 1 : 20, 1 :40, 1:80, 1:160 (в более высоких титрах аутоантитела обнаруживаются довольно редко), hard-life.ru.

2. В три пробирки с 0,1 мл исследуемых сывороток, прогретых при 58 - 60°С в течение 30 мин, добавляют 0,1 мл тканевых антигенов и 0,1 мл комплемента. В три отдельные пробирки с сывороткой и антигеном добавляют соответственно 1 - 1,5 - 2 гемолитические единицы комплемента.

3. Пробирки помещают на сутки в холодильник при 4°С.

. После этого во все пробирки добавляют 0,2 мл гемолитической смеси (3% бараньих эритроцитов пополам с гемолитической сывороткой, взятой в тройном титре - при титре на этикетке ампулы с гемолитической сывороткой 1 : 1200 ее разводят I :400). Пробирки помещают в термостат при 37°С до наступления гемолиза в контроле сыворотки и антигена, обычно на 20 - 30 мин.



Комментарии

Чтобы оставить комментарий, необходимо войти или зарегистрироваться


Translate to English
Сейчас на сайте посетителей:2