Смесь лимфоцитов и меченой сыворотки.

При оценке результатов определения ЕАС-РОК необходимо учитывать, что количество лимфоцитов, образующих розетки путем связывания с С 3-рецептором, ниже, чем число В-клеток, несущих на поверхности иммуноглобулины. Дело в том, что С 3-рецептор обнаруживается лишь на поверхности зрелых лимфоцитов, участвующих в процессах коопераци с Т-лимфоцитами при тимусзависимом иммунном ответе.

Комплекс антиген антитело присоединяется к с-рецептору В-лимфоцитов. Для обнаружения таких рецепторов используют эритроциты, сенсибилизированные антителами. Однако довольно часто при определении лимфоцитов, имеющих иммуноглобулиновые рецепторы, применяют иммунолюминесцентные методы.

При этом смешивают равные объемы взвеси лимфоцитов (2-Ю6 клеток мл) и меченой (например, флюоресцеином) кроличьей нммуносыворотки к глобулину человека. Такая сыворотка производится институтом эпидемиологии и микробиологии им. Н. Ф. Гамалеи АМН СССР (Москва), разгрузочный день на овсянке.

Смесь лимфоцитов и меченой сыворотки инкубируют при 4°С в течение 30 мин и трижды отмывают холодным фосфатным буфером с рН 7,2, после чего ресуспендируют в 0,1 мл раствора Хэнкса. Каплю меченых лимфоцитов наносят на предметное стекло, смешивают с каплей фосфатного буфера, разведенного пополам с глицерином, накрывают покровным стеклом и просматривают препарат в люминесцентном микроскопе. Обычно процент клеток, несущих на поверхности иммуноглобулиновые рецепторы, колеблется в пределах 8 - 39%. В среднем выявляется порядка 23% таких В-лимфоцитов.